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      “黑膠蟲”污染解決方案

          黑膠蟲”是近十幾年才發現的一種細胞污染物,“黑膠蟲”的分類目前尚無鑒定確認。

      “黑膠蟲”可寄生于動物細胞,也可以生存于培養基中,依靠細胞和培養基中的營養為生,并隨細胞傳代而傳代?!昂谀z蟲”與細胞競爭性生長,開始時對細胞并沒有什么影響,但當黑膠蟲的數量多到一定程度的時候, 細胞生長就會受到影響直至死亡,嚴重影響了科研活動的開展和進行。所以“黑膠蟲”的污染常在培養條件改變、細胞接種密度降低、細胞狀態不佳時顯現并使實驗中斷,尤其在凍存細胞復蘇時可造成大量細胞死亡。

      目前比較公認的觀點認為“黑膠蟲”是一種微生物,增殖緩慢但對細胞有損害,數量達到一定程度可引起細胞死亡,其來源可能是細胞本身的污染或從動物取材時污染造成的。該污染在全世界細胞實驗室中普遍存在,解決該問題是一個世界性難題。

      關于是什么問題的討論

      A. 玻璃培養瓶中的類似氧化硅的東西(曾經有文獻報道過)

      B. 據說這是黑膠蟲,又有人說是原生動物,好像也沒個統一的說法

      C. 據病毒所和軍科院鑒定是一種寄生于牛血清內的一種原蟲,似乎和草履蟲和變形蟲有類似之處,然而由于課題經費不夠而不能繼續進行下去。

      D. 有人說是納米級的細菌

      其他的特點

      (1)形態上有些像細菌,直徑約在0.5~1微米,

      (2) 在400X倒置顯微鏡小,有典型的布朗運動(不規則的原地小距離抖動)。

      (3) 細胞內好像也有人存在

      (4) 但并不引起培養液混濁

      (5) 時間稍長,細胞狀態明顯惡化,最后死亡

      大家的處理:

      1.換好一點的血清(我覺著和血清的關系不大)。

      2.如果是貼壁細胞的話,可用無菌的PBS洗幾次,可一定程度上緩解。若是懸浮的話,就不太好處理啦,可以向其中少加一點滋養細胞(從小鼠腹腔內取得巨噬細胞,這種細胞不分裂,過一陣就死掉了,做抗體雜交瘤融合的同志肯定知道)。加滋養細胞對有黑膠蟲的剛復蘇的細胞很有效!還有就是實驗環境要注意好,保持細胞間整個環境的潔凈度。

      3.換用進口的一次性塑料培養瓶。

      4.建議清理無菌室所有物品,重新滅菌,用KMnO4熏蒸,按首次使用無菌室做,細胞重新復蘇。

      5. 在換液前先加入生理鹽水并輕輕拍打,沖洗干凈后再加入培養液,堅持天天洗,傳代時加生理鹽水再離心一次,接種密度稍大一些,一段時間后,蟲子就會大大減少,對細胞的生長也不會有大的影響。

      6.有材料稱minocycline具有一定的作用,可以和換液結合起來使用。

      在細胞培養實驗中,人們遇到的黒膠蟲并不都是一樣的,有像細菌的、有像支原體的、有像原蟲的、有像真菌的,還有像細胞碎片的。在國內各實驗室的器材條件參差不齊,而且實驗人員的操作質量也不盡相同,同一種現象也可能有些許差異,當用描述出來的現象的差異可能變大也可能變小。所以很多人看到細胞被細菌污染了,不好處理,而且描述出來的現象和流傳的黑膠蟲類似,就會把培養失敗的原因歸結到無法處理的黒膠蟲污染,甚至可能說它發現的是真正的黑膠蟲。這樣的事情多了,黑膠蟲就會人為的變種,像什么的都有。黑膠蟲是否存在,還有待于科學的發展。但有一點可以肯定的,大部分人發現的“黒膠蟲”并不是真正那個未知的黒膠蟲,而是不很常見的細菌、真菌、原蟲等微生物污染。

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